دوره PCR

به طور کلی،‌ هدف از PCR فراهم کردن تعداد کپی‌های فراوان از ناحیه مورد نظر است. این کپی‌ها در گام بعد،‌ برای بررسی و تحلیل ویژگی‌ها یا انجام مراحل مختلف کلونینگ و موارد گوناگون دیگر مصرف می‌شوند. تعیین توالی، انتقال به ژل الکتروفورز و درج در پلاسمید، مثال‌هایی از این دست هستند.

به سادگی می‌توان حدس زد که PCR در عرصه‌های مختلف علوم زیستی، از اهمیت و کاربرد بالایی برخوردار است. برخی از این حوزه‌ها عبارتند از:

• زیست‌شناسی مولکولی
• تشخیص پزشکی
• شاخه‌هایی از اکولوژی

اجزای PCR

آنزیم «Taq پلیمراز»، پرایمرها، DNA الگو و نوکلئوتیدها – واحدهای ساختاری DNA –  اجزای کلیدی یک واکنش PCR به شمار می‌روند. این اجزا، همراه با کوفاکتورهای مورد نیاز آنزیم، در یک تیوب کوچک، جمع می‌شوند و سپس، یک چرخه متناوب از گرمایش و سرمایش، بارها و بارها تکرار می‌شود تا سرانجام، میلیون‌ها نسخه از DNA مورد نظر ساخته شود.

Taq پلیمراز

واکنش PCR نیز مانند فرایند «همانندسازی DNA» به آنزیم DNA پلیمراز وابسته است. این آنزیم، فرایند ساخته شدن رشته جدید را از روی رشته قدیمی (الگو) کاتالیز می‌کند. آنزیم DNA پلیمرازی که معمولا در واکنش PCR به کار گرفته می‌شود، Taq پلیمراز نام دارد. این آنزیم از یک باکتری مقاوم به گرما به نام «ترموس آکواتیکوس» (Thermus aquaticus) گرفته شده است.

باکتری ت. آکواتیکوس در چشمه‌های آب داغ و دریچه‌های گرمابی زندگی می‌کند. این دریچه‌ها در بستر دریا و اقیانوس، در نزدیکی مکان‌های فعال آتشفشانی قرار دارند و محل خروج هوای گرم هستند. بنابراین می‌توان حدس زد که آنزیم‌های مختلف این باکتری، از جمله DNA پلیمراز، نسبت به گرما بسیار مقاوم هستند. به طوری که این آنزیم،‌ در دمای 70 درجه سانتیگراد، در فعال‌ترین حالت خود قرار دارد، دمایی که در آن، بیشتر آنزیم‌های انسانی، غیرفعال خواهند شد.

پیش از آن که جزئیات بیشتری را در مورد Taq پلیمراز بررسی کنیم، می‌بایست با سه اصطلاح علمی در حوزه آنزیم‌ها آشنا شویم.

• «پایداری گرمایی» (Heat-Stability): توانایی آنزیم در حفظ ساختار سه‌بعدی و عملکرد خود در دماهای بالاتر از محیط مناسب خود.
• «قدرت پردازش» (Processivity): توانایی آنزیم در حفظ اتصال به سوبسترا تا پایان واکنش. بالاتر بودن قدرت پردازش، به معنای آن است که آنزیم می‌تواند تعداد بیشتری واکنش را تا مرحله نهایی به پیش ببرد و پیش از آن که واکنش به پایان برسد،‌ سوبسترا را رها نخواهد کرد.
• «صحت عملکرد» (Fidelity): توانایی اتصال مولکول صحیح، در جای صحیح. در مورد پلیمرازها، این ویژگی، به معنای آن است که در مقابل هر نوکلئوتید، مولکول مکمل آن قرار خواهد گرفت. همانطور که مشخص است، این ویژگی در PCR دارای اهمیت فراوانی است چراکه هرگونه اشتباه در جایگذاری نوکلئوتیدها، به تغییرات قابل توجهی در نتیجه نهایی آزمایش می‌انجامد.

پایداری گرمایی،‌ Taq پلیمراز را به یک آنزیم ایده‌آل برای PCR تبدیل می‌کند چراکه در این واکنش، دمای محیط، بارها و بارها افزایش می‌یابد تا رشته‌های الگو از یکدیگر باز شوند و دوباره واکنش تکثیر از سر گرفته شود. در واقع، دمای حدود 72 درجه سانتیگراد، نه تنها موجب کاهش فعالیت Taq پلیمراز نمی‌شود، بلکه آن را به طور چشمگیری افزایش خواهد داد. در دماهای حدود 90 درجه سانتیگراد یا بالاتر از آن، اگرچه آنزیم، عملا فعالیت قایل توجهی نخواهد داشت، اما ساختار خود را حفظ می‌کند و در صورت کاهش دما، دوباره به فرم فعال خود برمی‌گردد.

علاقه مندان به این دوره ها میتوانند جهت اطلاعات و مشاوره بیشتر با شماره واحد ثبت نام موسسه تماس بگیرند.
و از شرایط ویژه بهرمند شوید.

09392074626
021-66967620
021-66482031

مرکز علوم و فنون آتی نگر
تهران – خیابان انقلاب – بین چهار راه ولیعصر(عج) و حافظ – ضلع شمالی خ انقلاب – پلاک۷۵۳ – واحد ۵

1. آشنایی با علل PCR و مبانی آن
2.استخراج DNA از نمونه انسانی
3. استخراج RNA گیاهی
4. الکتروفوز
5. ساخت ژل اگارز و نحوه عملکرد
6. انجام PCR
7.انجام realtime PCR
8.انجام کار با سانتریفیوژ
تفاوت PCR ها و کاربردهای آن

حداقل مدرک تحصیلی برای شرکت در این دوره دارا بودن دیپلم می باشد.